Preview

Российский иммунологический журнал

Расширенный поиск

Визуализация в10-регуляторных клеток в периферической крови при физиологической беременности

https://doi.org/10.46235/1028-7221-1004-VOB

Полный текст:

Аннотация

Актуальным трендом в исследованиях В-клеточного звена иммунной системы является изучение малых субпопуляций. Установлено, что минорная субпопуляция IL-10 продуцирующих В-клеток (B10-reg клетки) обладает свойствами ограничивать избыточные реакции врожденного и адаптивного иммунного ответа. Показан их регуляторный и патогенетический эффект при различных физиологических и патофизиологических состояниях, в частности при патологии беременности.

Вследствие низкого содержания ВЮ-reg клеток в крови (до 1%) и сложностей визуализации данных проточной цитометрии, разработанный ранее метод, основанный на продолжительной стимуляции клеток периферической крови коктейлем факторов ((CD40L + CpG) и РМА), вызывающих активацию, пролиферацию и созревание клеток, позволяет визуализировать обогащенную фракцию ВЮ-reg клеток (В10-клетки + про-В10-клетки), содержание которой превышает 5%. Целью данного исследования явилось получение стимулированной ex vivo популяции В10-клеток + про-В10-клеток из периферической крови пациенток с физиологической беременностью и разработка оптимальной стратегии гейтирования ВЮ-reg клеток для их визуализации.

У пациенток с физиологической беременностью в III триместре осуществляли забор периферической крови. Проводилась стимуляция клеток по двум протоколам. Первый протокол: короткая (5 часов) стимуляция клеток цельной крови в стерильных условиях коктейлем PMA + иономицин + брефельдин А. Второй протокол: продолжительная (48 часов) стимуляция выделенной мононуклеар-ной фракции в стерильных условиях коктейлем (CD40L + CpG) с добавлением в последние 5 часов РМА + иономицин + брефельдин А. Проводилось окрашивание клеток на поверхностные маркеры (CD45, CD19, CD24, CD27, CD38) и внутриклеточное содержание IL-10. Анализ образцов выполняли на проточном цитометре Navios™.

Проведен пятицветный цитометрический анализ и разработана стратегия последовательного гейтирования, основанная на выделении гейта по лимфоцитам (маркер CD45); ограничении В-лимфоцитов (маркер CD19); выделении субпопуляции В-клеток, экспрессирующих маркер CD24; ограничении двух искомых субпопуляций В10-reg клеток по CD27 и CD38: CD19+CD24hiCD27+IL-10+ и CD19+CD24hiCD38hiIL-10+. Стимуляция клеток по первому протоколу позволяет визуализировать до 1% обеих субпопуляций, по второму около — 10%. Метод открывает перспективы фундаментальных исследований B10-reg клеток при беременности. Детектируемые количества обогащенной популяции B10-reg клеток могут иметь диагностическое и прогностическое значение в клинике при идиопатических акушерских осложнениях.

Об авторах

М. М. Зиганшина
Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова Министерства здравоохранения РФ
Россия

Зиганшина Марина Михайловна — кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клинической иммунологии.

117997, Москва, ул. Акад. Опарина, 4.

Тел.: 8 (903) 105-97-46.


Конфликт интересов:

Нет



С. В. Хайдуков
Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова Министерства здравоохранения РФ; Институт биоорганической химии имени академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук
Россия

Хайдуков Сергей Валерьевич — доктор биологических наук, советник директора НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова МЗ РФ; старший научный сотрудник лаборатории углеводов ИБХ им. ак. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН.

Москва.


Конфликт интересов:

Нет



Список литературы

1. Alhabbab R.Y., Nova-Lamperti E., Aravena O., Burton H.M., Lechler R.I., Dorling A., Lombardi G. Regulatory B cells: Development, phenotypes, functions, and role in transplantation. Immunol. Rev., 2019, Vol. 292, no. 1, pp. 164-179.

2. Candando K.M., Lykken J.M., Tedder T.F. B10 cell regulation of health and disease. Immunol. Rev., 2014, Vol. 259, no. 1, pp. 259-272.

3. Iwata Y., Matsushita T., Horikawa M., Dilillo D.J., Yanaba K., Venturi G.M., Szabolcs P.M., Bernstein S.H., Magro C.M., Williams A.D., Hall R.P., St Clair E.W., Tedder T.F. Characterization of a rare IL-10-competent B-cell subset in humans that parallels mouse regulatory B10 cells. Blood, 2011, Vol. 117, no. 2, pp. 530-541.

4. Jensen F., Muzzio D., Soldati R., Fest S., Zenclussen A.C. Regulatory B10 cells restore pregnancy tolerance in a mouse model. Biol. Reprod., 2013, Vol. 89, no. 4, 90. doi: 10.1095/biolreprod.113.110791.

5. Lima J., Martins C., Leandro M.J., Nunes G., Sousa M.J., Branco J.C., Borrego L.M. Characterization of B cells in healthy pregnant women from late pregnancy to post-partum: a prospective observational study. BMC Pregnancy Childbirth, 2016, Vol. 16, no. 1, 139. doi: 10.1186/s12884-016-0927-7.

6. Mizoguchi A., Mizoguchi E., Takedatsu H., Blumberg R.S., Bhan A.K. Chronic intestinal inflammatory condition generates IL-10-producing regulatory B cell subset characterized by CD1d upregulation. Immunity, 2002, Vol. 16, no. 2, pp. 219-230.

7. Muzzio D., Zenclussen A.C., Jensen F. The role of B cells in pregnancy: the good and the bad. Am. J. Reprod Immunol., 2013, Vol. 69, no. 4, pp. 408-412.

8. Rolle L., Memarzadeh Tehran M., Morell-Garda A., Raeva Y., Schumacher A., Hartig R., Costa S.D., Jensen F., Zenclussen A.C. Cutting edge: IL-10-producing regulatory B cells in early human pregnancy. Am. J. Reprod. Immunol., 2013, Vol. 70, no. 6, pp. 448-453.

9. Tedder TF. B10 cells: a functionally defined regulatory B cell subset. J. Immunol., 2015, Vol. 194, no. 4, pp. 1395-1401.

10. Wang L., Fu Y., Chu Y. Regulatory B Cells. Adv. Exp. Med. Biol., 2020, Vol. 1254, pp. 87-103.

11. Wortel C.M., Heidt S. Regulatory B cells: Phenotype, function and role in transplantation. Transpl. Immunol., 2017, Vol. 41, pp. 1-9.

12. Wu H., Su Z., Barnie P.A. The role of B regulatory (B10) cells in inflammatory disorders and their potential as therapeutic targets. Int. Immunopharmacol., 2020, Vol. 78, 106111. doi: 10.1016/j.intimp.2019.106111.

13. Zhao H., Feng R., Peng A., Li G., Zhou L. The expanding family of noncanonical regulatory cell subsets. J. Leukoc. Biol., 2019, Vol. 106, no. 2, pp. 369-383.


Дополнительные файлы

Для цитирования:


Зиганшина М.М., Хайдуков С.В. Визуализация в10-регуляторных клеток в периферической крови при физиологической беременности. Российский иммунологический журнал. 2021;24(2):269-274. https://doi.org/10.46235/1028-7221-1004-VOB

For citation:


Ziganshina M.M., Khaidukov S.V. Visualization of B10 regulatory cells in peripheral blood in physiological pregnancy. Russian Journal of Immunology. 2021;24(2):269-274. (In Russ.) https://doi.org/10.46235/1028-7221-1004-VOB

Просмотров: 44


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 1028-7221 (Print)